戊二醛二步法實(shí)驗(yàn)原理及步驟

產(chǎn)品名稱：戊二醛 

規(guī)格：BR，25-28%

包裝：100ML/500ML/4LT/20L

CAS： 111-30-8

分子式：C5H8O2

分子量：F.W. 100.12

保存條件：  RT

作用：科研

戊二醛二步法
1. 原理
戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價(jià)結(jié)合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白結(jié)合物。
2. 標(biāo)記步驟
（1）稱取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中，于室溫靜置夜。
（2）反應(yīng)后的酶溶液經(jīng)Sephadex G-25層析柱，用生理鹽水洗脫。流速控制在1ml/1分鐘，收集棕色流出液。如體積大于5ml，則以PEG濃縮至5ml。放置25ml小燒杯中，緩慢攪拌。
（3）將待標(biāo)記的抗體12.5mg用生理鹽水稀釋至5ml，攪拌下逐滴加入酶溶液中。
（4）用1M PH9.5碳酸緩沖液0.25ml，繼續(xù)攪拌3小時(shí)。
（5）加0.2M賴氨酸0.25ml，混勻后，置室溫2小時(shí)。
（6）在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4℃ 1小時(shí)。
（7）3000rpm離心半小時(shí)，棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次，zui后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。
（8）將上述溶液裝入透析袋中，對0.15M PH7.4的PBS緩沖鹽水透析，去除銨離子后（用萘氏試劑檢測），10,000rpm離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結(jié)合物，分裝后，冰凍保存。
 

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